氫氣對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及研究進(jìn)展

肝臟缺血再灌注損傷是肝臟手術(shù)過程中常見的、多因素參與的病理生理變化，可產(chǎn)生氧自由基，損傷肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，影響肝臟的功能，是導(dǎo)致肝臟外科患者術(shù)后肝功能衰竭甚至死亡的主要原因。因此，如何減輕或防治肝臟缺血再灌注損傷是目前肝臟外科研究的熱點(diǎn)，然而到目前為止尚沒有可以治療肝臟缺血再灌注損傷的有效方法。氫氣作為一種生理惰性氣體，是宇宙的重要組成部分，也是維持行星運(yùn)行的燃料…。氫氣具有還原性，能直接與氧化成分反應(yīng)，同時(shí)也很易燃，曾用作航天飛機(jī)的推進(jìn)劑。氫氣是質(zhì)量最輕的氣體，分子小且呈電中性，很容易擴(kuò)散，能輕易地穿過細(xì)胞膜及細(xì)胞器膜。由于氫氣麻醉性小，在減壓環(huán)境下不易產(chǎn)生氣泡，已被廣泛用于預(yù)防潛水員減壓病的發(fā)生。最近，Ohsawa等舊。研究發(fā)現(xiàn)氫氣的抗氧化特性在臨床治療特別在缺血再灌注損傷方面有廣闊的應(yīng)用前景，為氫氣的臨床應(yīng)用提供了新的思路。1缺血再灌注與氧化應(yīng)激當(dāng)組織受到缺血再灌注時(shí)，活性氧簇(reactive oxygenspecies ROS)在再灌注的早期大量產(chǎn)生，引起強(qiáng)烈的細(xì)胞氧化，從而對(duì)肝、腦、心、腎等產(chǎn)生嚴(yán)重的損傷口j。延長(zhǎng)熱缺血時(shí)間則會(huì)加重再灌注引起的氧化應(yīng)激，導(dǎo)致更嚴(yán)重的再灌注損傷M J。而且ROS已被認(rèn)為是導(dǎo)致生活方式相關(guān)疾病，特別是癌癥和衰老的主要原因。因此，抑制缺血再灌注時(shí)的氧化應(yīng)激，安全、有效的清除ROS或氧自由基已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)之一。氧化應(yīng)激是過多的ROS或自由基引起的強(qiáng)烈的細(xì)胞氧化。過多的ROS會(huì)導(dǎo)致DNA碎裂，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和蛋白失活，從而引起細(xì)胞凋亡或壞死"1。在ROS中，盡管0：一和H20：有細(xì)胞毒作用，在低濃度下卻有重要的的生理功能：它們是大量信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的信號(hào)調(diào)節(jié)分子，可調(diào)節(jié)重要的生物進(jìn)程，如細(xì)胞凋亡，增殖和分化。高濃度下，H：0：通過髓過氧化酶轉(zhuǎn)化為次氯酸；次氯酸可防止細(xì)菌入侵。NO，另一種ROS，可作為神經(jīng)遞質(zhì)和調(diào)控血管擴(kuò)張。OH是一種強(qiáng)效的ROS，有研究表明羥基來源于生物系統(tǒng)中H．w反應(yīng)或Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的過氧化物和過氧化氫，能與核酸、脂質(zhì)、蛋自反應(yīng)導(dǎo)致嚴(yán)重的細(xì)胞氧化∽’“。由于超氧陰離子和過氧化氫可通過抗氧化酶、超氧化物歧化酶和過氧化酶或谷胱甘肽過氧【作者單位】上海市東方肝膽外科醫(yī)院特需科，上海200438化物酶來清除，而目前人體內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)清除OH的生物酶。因此，安全、有效的清除OH是一個(gè)關(guān)鍵抗氧化過程。2氫氣與缺血再灌注損傷目前通過呼吸內(nèi)源性氣體信號(hào)分子來治療疾病已逐步引起人們的重視，這些氣體在應(yīng)激條件下生成增加反映了其對(duì)機(jī)體存在保護(hù)性作用。已有學(xué)者研究證明呼吸NO、CO、H：S對(duì)于多種器官的缺血再灌注損傷都有很好的保護(hù)作用¨“…。然而，這些氣體都存在內(nèi)在的毒性作用，若要將其應(yīng)用于臨床治療中，就需要通過進(jìn)一步研究，找出既有有效的治療效果又能避免其毒性作用的治療濃度，但目前尚未有相關(guān)研究結(jié)果報(bào)道。因此，沒有毒性作用的氫氣就顯示出特有的臨床應(yīng)用價(jià)值。Ohsawa等雎。研究表明氫氣可以作為一種治療性的抗氧化劑來中和缺血再灌注后的氧化應(yīng)激。為了誘導(dǎo)RoS的產(chǎn)生，作者給細(xì)胞施加線粒體呼吸復(fù)合物I抑制劑或使之處于缺乏氧氣和葡萄糖的環(huán)境中。在氧化損傷后，細(xì)胞經(jīng)受線粒體去極化，ATP缺乏，DNA氧化，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和細(xì)胞的壞死、凋亡。若將氫氣溶解于培養(yǎng)基中，則能防止上述損傷的發(fā)生，增強(qiáng)細(xì)胞活力，并與之存在劑量依賴性。在這些研究中，Ohsawa等口。發(fā)現(xiàn)能有效的促進(jìn)細(xì)胞生存的的氫氣濃度為25¨moL／L。由于氫氣可以保護(hù)線粒體及核中DNA免受氧化損傷，這表明氫氣彌散力強(qiáng)，能滲透到細(xì)胞核與線粒體(產(chǎn)生活性氧簇的主要場(chǎng)所)中。試驗(yàn)中熒光探針和電子順磁共振波譜顯示氫氣可以選擇性清除羥基，而不會(huì)影響氧化還原反應(yīng)或細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的ROS。Ohsawa等雎。認(rèn)為選擇性羥基清除是缺血再灌注后氫氣保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷的機(jī)制。為了檢測(cè)氧化應(yīng)激中氫氣的治療效能，Ohsawa等口1研究大鼠模型(大腦中動(dòng)脈結(jié)扎再灌注)時(shí)發(fā)現(xiàn)：如果在損傷再灌注階段前吸人2％的氫氣可以顯著減少梗死體積，而且可以明顯降低腦組織脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和DNA氧化。氫氣治療不僅可以抑制損傷初期的大腦損傷，而且可以抑制損傷進(jìn)展，增強(qiáng)長(zhǎng)期的神經(jīng)功能，如體溫調(diào)節(jié)和體重維持。氫氣的治療性保護(hù)作用對(duì)于肝臟的缺血再灌注損傷同樣適用，可以顯著減輕肝功能損傷，有望為臨床上延長(zhǎng)肝門阻斷時(shí)間、促進(jìn)術(shù)后患者肝功能的恢復(fù)提供理論基礎(chǔ)，為肝臟缺血再灌注損傷的防治提供簡(jiǎn)便、實(shí)用的輔助治療手段。萬方數(shù)據(jù)肝膽外科雜志2009年10月第17卷第5期Journal ofHepatobiliary Surgery，Vol，17，No．5，Oct．2009 391Fukuda等H1通過測(cè)定缺血再灌注肝臟中ALT、MDA等指標(biāo)及組織病理學(xué)分析表明呼吸氫氣能顯著抑制缺血再灌注損傷導(dǎo)致的肝細(xì)胞變性，減輕脂質(zhì)過氧化損傷，從而有效的保護(hù)肝細(xì)胞功能。Hayashida等¨u研究表明氫氣在心肌缺血再灌注中同樣具有顯著的保護(hù)作用，且對(duì)于氧飽和度，血液動(dòng)力學(xué)參數(shù)無顯著影響。他們首先在離體灌注心臟實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了呼吸氫氣有利于心臟左室功能的恢復(fù)，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)氫氣可以減少缺血再灌注后心肌梗死的體積，防止缺血再灌注損傷后病理性的心肌左室重塑，且2％的氫氣能提供最顯著的保護(hù)作用。氫分子對(duì)于缺血再灌注器官不僅具有抗氧化作用，還能顯著抑制組織的炎性反應(yīng)，從而促進(jìn)器官功能的恢復(fù)。Zheng等¨21研究表明大鼠小腸缺血再灌注前10 min靜脈注射氫生理鹽水，能顯著降低血清DAO、TNF一0【、IL—B、IL-6及組織MDA、MPO水平，減輕小腸形態(tài)學(xué)損傷，通過抑制小腸移植后氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)來保護(hù)小腸缺血再灌注損傷。該小組進(jìn)一步研究表明靜脈注射氫生理鹽水還可以抑制大鼠腸缺血再灌注后肺組織中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，脂質(zhì)過氧化，NF．KB活性及TNF-d、IL-B水平，從而減輕腸缺血再灌注后的肺損傷¨…。Buchholz等¨4’認(rèn)為在小腸移植過程中呼吸氫氣也能有效減輕移植過程中小腸缺血再灌注損傷。小腸移植后的大鼠胃腸動(dòng)力及空腸平滑肌收縮受抑制，腸壁及受體肺組織炎性因子顯著升高伴中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，腸粘膜糜爛、腸壁滲透性增加。而術(shù)中呼吸氫氣后則能顯著改善上述病理改變，促進(jìn)小腸移植后腸道功能的恢復(fù)。在肝臟缺血再灌注過程中氫分子治療是否存在上述作用，仍需進(jìn)一步研究。缺血再灌注損傷包括急性壞死和延遲細(xì)胞凋亡兩個(gè)步驟¨“。凋亡是程序性細(xì)胞死亡，其特征性超微結(jié)構(gòu)改變包括細(xì)胞皺縮，核濃縮，DNA碎裂。在分子水平，凋亡可被天冬氨酸一半胱氨酸蛋白酶的級(jí)聯(lián)反應(yīng)所激活，包括caspase-12和caspase-3等¨“。Cai等Ⅲ1研究發(fā)現(xiàn)氫氣能通過減少HI引發(fā)的caspase依賴性凋亡來提供神經(jīng)保護(hù)。通過Trc染色，Nissl染色，TUNEL染色及Caspase一12和一3的活力檢測(cè)，Cai等認(rèn)為HI損傷后立即予以2％氫氣治療，能顯著降低大腦梗死率，增加殘存神經(jīng)元數(shù)目，降低Caspase一12和．3的活力，減少細(xì)胞凋亡，研究還發(fā)現(xiàn)氫氣的神經(jīng)保護(hù)作用有時(shí)間依賴性，120 min組的神經(jīng)保護(hù)作用顯著強(qiáng)于其他兩組。這就為進(jìn)一步探究氫氣的細(xì)胞保護(hù)機(jī)制及臨床應(yīng)用提供了新的研究方向與理論基礎(chǔ)。3展望目前的研究均已證明氫氣通過清除羥基、抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)來保護(hù)細(xì)胞。然而，在細(xì)胞保護(hù)的基因表達(dá)中未發(fā)現(xiàn)氫氣介導(dǎo)的基因改變，氫氣的抗氧化活性中是否激活潛在性的信號(hào)通路或調(diào)控蛋白尚未得到證實(shí)。因此氫氣保護(hù)細(xì)胞組織免受氧化應(yīng)激的機(jī)制仍需進(jìn)一步闡明。眾所周知，人和動(dòng)物消化道內(nèi)許多正常細(xì)菌能產(chǎn)生氫氣，一些研究表明腸道菌群產(chǎn)生的大部分氫氣被消化道吸收入血‘181。有研究表明胃和肝中有豐富的氫氣：Olson和Mai．el"Ⅲ3測(cè)定了鼠胃粘液層平均氫氣量為43斗mol／L，濃度范圍17～93¨mol／L。Maier等‘203也發(fā)現(xiàn)鼠肝中平均氫氣濃度為53 Ixmol／L,鼠小腸中氫氣濃度范圍118—239斗mol／L。這些研究表明肝、胃、脾、小腸中的氫氣濃度以達(dá)到了缺血再灌注損傷后抗氧化應(yīng)激的濃度，所以我們認(rèn)為氫氣是一種內(nèi)源性抗氧化劑。然而內(nèi)源性氫氣是否具有同樣的抗氧化治療作用則需要我們進(jìn)一步研究證實(shí)?？傊瑲錃庾鳛橐环N治療性抗氧化劑，通過選擇性清除羥基，能對(duì)多器官的缺血再灌注損傷起有效的保護(hù)作用，而且氫氣易于制備，使用時(shí)方便、安全，在臨床治療中有廣闊的應(yīng)用前景，可為肝臟缺血再灌注損傷的防治開辟一條嶄新的道路